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人血清蛋白與干擾素α-2b融合蛋白的定量和定性測定

更新時(shí)間:2021-03-05瀏覽:2747次

 背景介紹

 

利用人血清白蛋白融合技術(shù),制備一種在體內(nèi)半衰期長,生物學(xué)活性高的長效研究重組人血清白蛋白.干擾素α2b融合蛋白,可用于病毒性肝炎,腫瘤等相關(guān)疾病的治療.重組人血清白蛋白‐干擾素α2b融合蛋白是一種新型、長效、具有抗病毒、抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)作用的細(xì)胞因子其半衰期較天然的干擾素α2b長且干擾素抗體的產(chǎn)生時(shí)間相對較晚在臨床上對患者本次實(shí)驗(yàn)使用的樣品為康寶集團(tuán)客戶提供的三個批次的重組人血清蛋白與干擾素α-2b融合蛋白樣品(編號:rIFNα-2b-HAS 20161101、 rIFNα-2b-HSA 20161102、 rIFNα-2b-HSA 20161203),主要進(jìn)行蛋白的分離和定性定量實(shí)驗(yàn)。

1.實(shí)驗(yàn)條件儀器:LUMEX  Capel 205毛細(xì)管電泳儀

毛細(xì)管條件:長度42 cm,內(nèi)徑75 um

分析波長:280 nm

分析電壓:15 kV

分析溫度:20℃

進(jìn)樣條件:30 mbar進(jìn)樣10秒

分析時(shí)間:9 min

緩沖液:15 mmol磷酸鹽緩沖液

2.實(shí)驗(yàn)過程

取HAS 20161101批樣品,分別通過原液稀釋2倍,4倍,8倍,16倍,共5個濃度濃度,濃度分別為236.25、472.5、945、1890和3780 mg/L。按照設(shè)置的條件進(jìn)行分析,每個樣品重復(fù)進(jìn)樣3次。

空白:取水作為空白對照溶液。進(jìn)樣2次。按照此分析程序及條件,樣品的圖譜如下:下:

從以上的結(jié)果圖譜中可以看出,在所應(yīng)用的條件下基本能夠分析出樣品,樣品的遷移時(shí)間在7-8 min左右,三次進(jìn)樣的平行性非常好。

通過不同濃度樣品的濃度以及峰面積通過外標(biāo)法進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制,儀器軟件結(jié)果如下:

圖中可以看出,樣品的曲線情況,線性系數(shù)R= 0.9995、0.9999和0.9995, 滿足分析的要求,相對偏差比較小。

此次換了毛細(xì)管和緩沖液進(jìn)行分析,比之前時(shí)間晚一些。如果更換換柱子可能時(shí)間會有所不同,但是對分析影響不大。本條件是本次實(shí)驗(yàn)所應(yīng)用,條件后期還應(yīng)該可以進(jìn)行優(yōu)化和設(shè)置,可以采用不同的毛細(xì)管及SDS條件進(jìn)行條件的優(yōu)化。

 

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